натрий серноватистокислый по ГОСТ 27068, х.ч.;

фуксин (основной и кислый) для микробиологических целей;

хинозол;

хлороформ по ГОСТ 20015;

Д-циклосерин.

Подготовка к анализу. Окраску препаратов по Граму проводят по ГОСТ 21237.

Приготовление физиологического раствора: 8,5 г хлористого натрия растворяют в 1 дм водопроводной воды. Раствор стерилизуют при давлении 10 Па в течение 20 мин.

Приготовление пептонной воды: В 1 дм дистиллированной воды добавляют 10 г пептона и 5 г хлористого натрия. Жидкость подогревают до растворения пептона, фильтруют, устанавливают рН 7,2-7,4 и стерилизуют при давлении 10 Па в течение 20 мин.

Приготовление мясо-пептонного агара (МПА): В 1 дм мясо-пептонного бульона добавляют 20 г агара-агара и кипятят при слабом нагревании, постоянно помешивая до полного растворения агара. Устанавливают рН среды 7,0-7,2.

Охлаждают до температуры 50-55 °С и осветляют яичным белком (из расчета белок одного яйца на 1 дм мясо-пептонного агара). Помещают агар в автоклав (не завинчивая крышку) или в аппарат Кохха на 1 ч, чтобы белок свернулся и, оседая, увлек за собой взвешенные частицы. Горячий раствор фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Разливают во флаконы и пробирки и стерилизуют в автоклаве в течение 20 мин при давлении 10 Па.

Питательная среда может быть приготовлена из сухого питательного агара.

Приготовление голодного агара: 2 г агара-агара растворяют в 100 см водопроводной воды. Раствор стерилизуют при давлении 10 Па в течение 20 мин.

Приготовление бульона Хоттингера: В 1 дм кипящей водопроводной воды опускают на 20 мин 1 кг мяса, освобожденного от костей, жира и сухожилий, нарезанного мелкими кусочками. Затем мясо вынимают, измельчают на мясорубке, снова кладут в тот же отвар. Добавляют 40 г измельченной поджелудочной железы, очищенной от жира и дважды пропущенной через мясорубку (вместо поджелудочной железы можно брать 5 г панкреатина), доливают 20 см хлороформа. Бутыль плотно закрывают пробкой и энергично встряхивают (пробку надо придерживать). Смесь оставляют для переваривания в термостате при 45 °С до 20 сут. Мясо в виде мелкозернистой массы оседает на дно бутыли. Жидкость над мясом должна быть прозрачной. Эту жидкость сливают и стерилизуют при 10 Па в течение 20 мин. Готовый раствор дает положительную реакцию на триптофан с бромной водой.

Приготовление бромной воды: 3-3,5 см чистого брома растворяют в 100 см дистиллированной (стерильной) воды.

Приготовление мясо-пептонного бульона (МПБ) на основе бульона Хоттингера: Основной раствор Хоттингера разводят в 5-10 раз (до соломенного цвета). На 1 дм разведенного бульона берут 10 г пептона и 5 г хлористого натрия. Затем устанавливают рН 7,3-7,4, кипятят 20 мин и фильтруют.

Режим стерилизации 20 мин при давлении 10 Па.

Приготовление среды Эндо: В 100 см расплавленного мясо-пептонного агара добавляют 1 г лактозы, растворенной в 5 см водопроводной воды, прокипяченной в течение 5 мин. МПА охлаждают до температуры 60-70 °С и к нему добавляют смесь растворов основного фуксина и сернистокислого натрия. Для приготовления смеси 0,5 г сернистокислого натрия растворяют в 5 см стерильной воды, кипятят в течение 5 мин, добавляют 1 см спиртового раствора 100 г/дм основного фуксина. После перемешивания среду разливают в чашки Петри. Среда Эндо в чашках должна иметь бледно-розовый цвет.