Методы бактериалогического анализа
Допускается замена поплавков клочками стерильной ваты.
Приготовление среды Мюллера:
Приготовление раствора серноватистокислого натрия. В мерный цилиндр с 50 г тиосульфата натрия добавляют дистиллированную воду до метки 100 см. Полученный раствор стерилизуют однократно в аппарате Коха 20 мин.
Приготовление раствора Люголя. В 100 см стерильной дистиллированной воды растворяют 25 г кристаллического йода и 20 г йодистого калия.
В стерильную колбу помещают 4,5 г х.ч. мела и стерилизуют сухим жаром при температуре 150 °С в течение 15 мин, наливают 90 см мясо-пептонного бульона (по п.3.8), стерилизуют в течение 30 мин при давлении 10 Па. В колбу с мясо-пептонным бульоном и мелом стерильно добавляют 2 см раствора Люголя и 10 см раствора серноватистокислого натрия, взбалтывают.
Приготовление среды Кауфмана: В 100 см стерильной среды Мюллера, приготовленной по п.3.15, стерильно добавляют 1 см водного раствора 1 г/дм бриллиантовой зелени и 5 см стерильной желчи крупного рогатого скота. Смесь хорошо взбалтывают (не стерилизуют).
Приготовление среды Гиса:
Для приготовления индикатора Андреде в 100 см дистиллированной воды растворяют 18,4 см 1 моль/дм раствора гидроокиси натрия и 0,3 г кислого фуксина. Раствор стерилизуют 5 мин при давлении 5·10 Па и хранят в темноте.
В 100 см дистиллированной воды растворяют 1 г пептона и 0,5 г хлористого натрия при нагревании. Затем фильтруют до тех пор, пока раствор не станет совершенно прозрачным.
В фильтрате устанавливают рН 7,0, прибавляют 0,5 г углевода, а затем 1 см индикатора Андреде. Полученную смесь разливают в пробирки с поплавками по 5 см и стерилизуют 20 мин при давлении 5·10 Па.
Среда должна быть бесцветной или соломенно-желтого цвета, без розового оттенка.
Допускается использовать готовые среды Гисса - сухой препарат с индикатором "ВР" и маннитом, лактозой, сахарозой, глюкозой.
Среду Плоскирева приготавливают из сухой готовой среды.
Среду Левина приготавливают из сухой готовой среды.
Среду висмут-сульфит-агар приготавливают из сухой готовой среды.
Приготовление хлористомагниевой среды "М" (модифицированной): Среда состоит из трех растворов А, В и С.
Приготовление дрожжевого экстракта: В 2 дм дистиллированной воды растворяют 1 кг прессованных хлебопекарных дрожжей. Полученную суспензию стерилизуют 30 мин текучим паром, затем отстаивают в холодильнике при температуре 4-6 °С в течение 5-6 сут.
Жидкость над осадком декантируют, приливают 2,5 см 0,01%-ного раствора кристалл-виолета, разливают во флаконы или пробирки и вновь стерилизуют при температуре 100 °С в течение 30 мин.
Экстракт хранят в холодильнике при температуре 4-6 °С в течение двух недель со дня приготовления.
Для приготовления раствора А в 90 см дистиллированной воды растворяют 0,42 г пептона, 0,7 г хлористого натрия, 0,15 г однозамещенного фосфорнокислого натрия, 2 см дрожжевого диализата. (При отсутствии дрожжевого диализата допускается заменять его дрожжевым экстрактом).
Для приготовления раствора В в 9 см дистиллированной воды растворяют 3,6 г кристаллического хлористого магния.
Раствор С состоит из 0,09 см водного раствора 50 г/дм бриллиантовой зелени.