Методы бактериалогического анализа
Приготовление нитратной плазмы: К 8 см свежей крови кролика добавляют стерильно 2 см лимоннокислого натрия 50 г/дм и отстаивают в холодильнике при температуре 4-9 °С в течение суток.
Допускается использовать готовую сухую цитратную плазму.
Приготовление бульона Вайнберга:
Приготовление мясной воды из сердца крупного рогатого скота: В 1 дм водопроводной воды добавляют 1 кг сердца крупного рогатого скота, пропущенного через мясорубку. Медленно нагревают до кипения, кипятят 20 мин, охлаждают, снимают жир, фильтруют через ватно-марлевый фильтр.
Приготовление пепсин-пептонной воды: В 4 дм водопроводной воды добавляют 400 г измельченной свежей печени крупного рогатого скота, 400 г измельченных свиных желудков, 40 г соляной кислоты (плотностью 1,19 г/см), перемешивают, подогревают до 50 °С и оставляют при комнатной температуре на 18-24 ч. Затем кипятят в течение 10 мин, декантируют (осаждают), фильтруют, добавляют 8 г двузамещенного фосфорнокислого натрия, устанавливают рН 7,4.
Смешивают 1 дм мясной воды из сердца крупного рогатого скота и 2 дм пепсин-пептонной воды, устанавливают рН 7,8-8,2, разливают по колбам и стерилизуют 10 мин при давлении 10 Па.
Приготовление сухой среды КПД (кито-пептоно-дрожжевой): В 1 дм теплой дистиллированной воды добавляют 65 г сухого порошка КПД. Устанавливают рН 7,8-8,0 и разливают в стерильную посуду с ватой. Стерилизуют 30 мин при давлении 5·10 Па.
Приготовление циклосериновой среды (СЦС): В 1 дм питательной основы (бульон Хоттингера п.3.7, бульон Вайнберга п.3.27, сухая кито-пептоно-дрожжевая п.3.28) добавляют последовательно 5 см раствора 100 г/дм сернокислого железа, 10 см раствора 100 г/дм сульфита натрия (кристаллического) и 40 см раствора 10 г/дм Д-циклосерина. Все перечисленные компоненты готовят отдельно на стерильной дистиллированной воде. Не следует их смешивать вместе перед добавлением к основе, так как может образоваться осадок.
Среду хранят в холодильнике при температуре 4-9 °С не более недели со дня приготовления.
Приготовление среды Вильсон-Блера: Раствор хлористого железа готовят на стерильной дистиллированной воде; раствор сернистокислого натрия стерилизуют в течение 1 ч текучим паром.
К 100 см расплавленного и охлажденного до температуры 80 °С мясо-пептонного агара, приготовленного по п.3.4 или 3.5, добавляют 1 г глюкозы (рН не ниже 7,2), 10 см раствора 200 г/дм сернистокислого натрия и 1 см раствора 80 г/дм хлористого железа. Смесь разливают в стерильные пробирки столбиком высотой по 10 см.
Приготовление мясной воды: В 1 кг мясного фарша, приготовленного из говядины высшего сорта, заливают 2 дм водопроводной воды и настаивают в холодильнике 24 ч; затем кипятят в течение 30 мин при постоянном помешивании и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. К полученному фильтрату добавляют воду до первоначального уровня.
Режим стерилизации 20 мин при давлении 10 Па.
Приготовление мясо-пептонного бульона (МПБ) из мясной воды: В 1 дм мясной воды добавляют 10 г пептона из 5 г хлористого натрия. Затем устанавливают рН 7,3-7,4, кипятят в течение 20 мин и фильтруют. Раствор стерилизуют 20 мин при давлении 10 Па.