Методы бактериалогического анализа
Для приготовления хлористомагниевой среды "М" (модифицированной) растворы А, В и С смешивают и стерилизуют 30 мин при давлении 5·10 Па.
Приготовление среды Крумвиде-Олькеницкого в модификации Ковальчука: В 1 дм дистиллированной воды растворяют 1 г гипосульфита, 0,6 г соли Мора, 10 г мочевины, 15 г лактозы х.ч., 3,5 г сахарозы и 2 г глюкозы. Устанавливают рН среды до 7,4-7,6. Добавляют 46 г сухой среды с сахарозой и индикатором ВР. Все размешивают, кипятят в водяной бане в течение 40 мин. Разливают в пробирки по 5-6 см. Среду, разлитую в пробирки, стерилизуют 20 мин при давлении 5·10 Па. После стерилизации среду скашивают так, чтобы в пробирке остался столбик высотой не менее 3 см.
Приготовление агара с бриллиантовым, зеленым и феноловым красным (БФА)
Для приготовления растворов красок: 0,5 г бриллиантового зеленого растворяют в 100 см дистиллированной воды;
0,4 фенолового красного, 16 см 0,1 моль/дм гидроокиси натрия - в 184 см дистиллированной воды.
Оба приготовленных раствора в плотно закрытых флаконах выдерживают в термостате при температуре 37 °С в течение суток. Небольшим нерастворившимся осадком можно пренебречь.
Для приготовления смеси красок в 200 см раствор фенолового красного добавляют 5 см бриллиантового зеленого. Смесь хранят в холодильнике. Срок хранения смеси не ограничен.
В 1 дм дистиллированной воды вносят 50 г сухого питательного агара, 10 г лактозы, 40 см 0,1 моль/дм соляной кислоты.
Смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 30 мин, затем в кипящей водяной бане не менее 1 ч, после чего на открытом огне (электроплитке) в течение 3-5 мин, фильтруют через вату (небольшой мутностью можно пренебречь).
Смесь разливают во флаконы, стерилизуют при давлении 5·10 Па в течение 30 мин и хранят в холодильнике до месяца со дня приготовления.
В 100 см среды с агаровой основой, предварительно расплавленной и охлажденной до 45 °С, вносят 4,1 см смеси красок. Среду разливают по чашкам Петри. Среда имеет цвет бутылочного стекла - зеленовато-желтый.
Приготовление молочно-солевого агара
Для приготовления солевого мясо-пептонного агара 65 г/дм в 1 дм расплавленного мясо-пептонното агара (пп.3.4; 3.5) добавляют 65 г х.ч. хлористого натрия. Устанавливают рН-7,4. Стерилизуют в автоклаве в течение 20 мин при давлении 10 Па.
В 100 см расплавленного и охлажденного солевого агара до 45 °С (п.3.24.1) добавляют 10 см стерильного обезжиренного молока, разливают по чашкам Петри. Среду хранят в холодильнике при температуре 4-9 °С в течение недели со дня приготовления.
Приготовление желточно-солевого агара (среды Чистович): Для приготовления желточного раствора в 200 см стерильного физиологического раствора добавляют стерильно один яичный желток и раствор взбалтывают. Раствор хранят в холодильнике при температуре 4-9 °С в течение одной недели со дня приготовления.
В 150 см расплавленного и охлажденного до 45 °С солевого агара 65 г/дм (п.3.24.1) стерильно добавляют 50 см желточного раствора, взбалтывают и разливают по чашкам Петри. Среду хранят в холодильнике при температуре 4-9 °С в течение недели со дня приготовления.